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粘附g蛋白偶联受体(agpcr)的特征是存在参与细胞-细胞和细胞-细胞外基质相互作用的自蛋白水解细胞外区域1。aGPCR自身蛋白水解诱导(GAIN)结构域内的自裂解产生两个原聚体- n端和c端片段-在受体到达细胞表面后保持非共价附着1。在n端片段解离后，GAIN结构域的c端作为一种栓系激动剂(TA)肽来激活七跨膜结构域，其机制目前尚不清楚。在这里，我们提供了aGPCR家族中两个不同成员的冷冻电子显微镜快照，GPR56(也称为ADGRG1)和嗜latrophilin 3 (LPHN3(也称为ADGRL3))。受体n端片段结合状态的低分辨率图表明，GAIN结构域灵活地向细胞外空间投影，使加密的TA肽远离7跨膜结构域。GPR56和LPHN3在其活性g蛋白偶联状态下的高分辨率结构揭示，在细胞外区域解离后，解密的TA肽与7跨膜结构域核心接合，并具有显著的保守相互作用，也涉及细胞外环2。TA结合稳定了跨膜螺旋6和7中间的断裂，促进aGPCR偶联和异三聚体G蛋白的激活。总的来说，这些结果使我们能够提出aGPCR激活的通用模型。

核糖体RNA是核糖体的中心成分，调节核糖体的功能和结构特性。在这里，我们报道了一个来自单细胞真核藻类Euglena gracilis的高度分化的细胞质核糖体的冷冻em结构。Euglena大核糖体亚基的独特之处在于它包含14个离散的rRNA片段，这些片段以非共价方式组装成标准核糖体结构。rRNA在转录后修饰中大量富集，这些修饰远远超出了催化RNA核心，有助于这种高度碎片化核糖体物种的稳定。在靠近蛋白质出口通道的扩展段中发现了一个独特的由五个腺苷碱基甲基化组成的簇，这样它就被定位为与新生肽相互作用。除了具有独特的rRNA扩增片段外，Euglena核糖体还包含四种新的核糖体蛋白，定位于核糖体表面，其中三种在其他真核生物中没有同源物。

RNA转录后修饰在生命的所有领域都很常见，主要与不同碱基位置的甲基化有关。甲基化经常发生在RNA碱基的特定位点，并似乎调节特定位点的分子间/分子内相互作用。在此，我们提出了一种利用液相色谱-质谱(LC-MS)鉴定位置单甲基化RNA核苷异构体的方法。该方法产生RNA RNA酶切片段的源内片段和随后的串联质谱(MS2)(伪ms3)谱，并通过比较其核内碱基片段离子谱与来自真实异构体的特征谱来区分位置甲基化碱基异构体。为了验证方法，我们独立地确定了所有已知的单甲基化核苷异构体在大肠杆菌16S/23S rrna中的位置。作为概念的证明，我们进一步应用这项技术来充分表征碱基修饰的核苷位置异构体，在来自利什曼原虫的rrna中，利什曼原虫是一种影响全球数百万人的人类血液寄生虫。本文所描述的方法将非常有利于描述各种细胞RNA中的RNA修饰谱，并且由于它只需要亚皮摩尔量的RNA，它也可以用于细胞中以微小量表示的RNA群体的结构功能研究。

利什曼原虫是一种单细胞真核寄生虫，在全球范围内折磨着数百万人，目前的治疗方法仅限于药物的选择，主要针对寄生虫细胞包膜中的元素。在这里，我们确定了利什曼核糖体与paromomycin (PAR)复合物的原子分辨率电子冷冻显微镜(cro - em)结构，paromomycin是一种最近被批准用于治疗致命内脏利什曼病(VL)的高效化合物。这种结构揭示了药物对寄生虫产生有害影响的机制。我们进一步表明PAR干扰了细胞质翻译的几个方面，因此突出了细胞质而不是线粒体核糖体作为主要药物靶点。研究结果还强调了par结合口袋中独特和保守的元素，这些元素可以作为开发新疗法的热点。

需要新的药物来增强过早终止密码子(PTC)抑制，以治疗囊性纤维化(CF)和其他由无义突变引起的疾病。我们在一系列互补的CF模型中测试了明确开发用于PTC抑制的新合成氨基糖苷类衍生物。使用双荧光素酶报告系统，在其局部序列环境(PTC两侧的三个密码子)中包含四种最常见的CF跨膜电导调节(CFTR)无义突变(G542X, R553X, R1162X和W1282X)，我们发现NB124促进了G542X, R1162X和W1282X PTC的最大读通。NB124还恢复了经CFTR- g542xcdna转基因稳定转导的Fischer大鼠甲状腺细胞中的CFTR全长表达和氯化物运输，并且优于庆大霉素和其他测试的氨基糖苷类药物。NB124使CFTR功能恢复到原代人支气管上皮(IIBE) CF细胞(G542X/ delF508)野生型活性的约7%，这是一种与内源性CFTR表达高度相关的临床前模型。在表达CFTR ptc的气道细胞中加入CFTR增强剂ivacaftor (VX-770)后，疗效进一步增强。NB124治疗在表达人CFTR- g542x转基因的CF小鼠模型中挽救了CFTR功能;疗效优于庆大霉素，并表现出良好的药代动力学特性，表明体外结果转化为体内临床获益。在基于组织的耳毒性模型中，NB124的细胞毒性也小于庆大霉素。这些结果为NB124和其他合成氨基糖苷提供了比庆大霉素和其他第一代氨基糖苷治疗指数提高10倍的证据，为广泛的CFTR无义突变提供了有前景的治疗。

利什曼病是一种由利什曼原虫属原虫引起的寄生虫病，影响着全世界数百万人。氨基糖苷类大多被认为是高效的广谱抗生素，通过选择性地靶向细菌核糖体的解码A位点发挥抗菌活性，导致异常蛋白质合成。最近，一些氨基糖苷类药物已获得临床批准，目前在世界范围内用于治疗利什曼病;然而，氨基糖苷类对利什曼菌产生有害作用的分子细节仍然相当模糊。基于解码位点在所有位点上的高度保守性，我们推测这些药物在利什曼原虫中的结合位点是核糖体A位点。然而，尽管最近细菌核糖体与氨基糖苷类复合物的x射线晶体结构阐明了氨基糖苷类作为抗生素的作用机制，但目前还没有关于其在利什曼原虫中的结合位点的数据。我们介绍了与利什曼核糖体a位点模型结合的两种不同氨基糖苷分子的晶体结构:Geneticin (G418)，一种用于治疗利什曼病的强效氨基糖苷，分辨率2.65-Å，以及Apramycin，显示为利什曼核糖体的强结合剂，分辨率1.4-Å，缺乏抗利什曼病活性。结构数据，再加上对两株利什曼菌的体外抑制测量，为不同氨基糖苷类抑制活性差异的来源提供了深入的见解。结合结构和生理数据为合理设计新的、更具体的氨基糖苷类衍生物作为潜在的治疗利什曼病的药物奠定了基础。

本文描述了一种基于溶胶-凝胶的甾体激素左炔诺孕酮(LNG)免疫亲和方法的发展，以及溶胶-凝胶基质格式的变化对所捕获抗体(Abs)活性和基质结构的影响。结果表明，采用四甲氧基硅烷(TMOS)为基质，TMOS:水比为1:8，含有10% MW 0.4 kDa的聚乙二醇(PEG)，为Ab包封的最佳溶胶-凝胶形式。添加高百分比PEG或高MW PEG均不能提高活性。TMOS:水比为1:12时，没有获得活性，很可能是因为在这些聚合条件下产生了非常致密的聚合物。不同格式的非特定绑定只有微小的差异。TMOS比四(2-羟乙基)正硅酸盐(THEOS)更有效地捕获抗左炔孕酮(LNG) Abs。然而，在4℃下将THEOS为基础的溶胶-凝胶老化几周可以稳定所捕获的Abs，并增加其结合能力。用荧光素异硫氰酸酯(FITC)标记的免疫球蛋白(IgGs)包裹在溶胶-凝胶基质中的共聚焦荧光显微镜显示，包裹的抗体在凝胶中均匀分布。扫描电子显微镜(SEM)图像显示了不同的溶胶-凝胶格式和前驱体的不同结构。