单细胞悬液的制备
流式细胞仪样品应以单细胞悬液的形式制备。细胞浓度从104－108．最常见的悬浮缓冲液是磷酸盐缓冲盐水(PBS)。
已经以单一形式存在的细胞，如来自组织培养的非粘附细胞或血细胞，制备起来很简单。它们只是在阅读前被收集、清洗、染色和过滤。
来自贴壁培养或固体组织的细胞必须分解才能产生单细胞。这可以通过机械、酶或使用螯合剂来完成:
- 机械分解适用于松散结合的结构，如来自培养的粘附细胞，骨髓和淋巴组织。它包括将切碎的组织悬浮液通过细针几次，然后根据需要进行研磨和超声检查
- 酶被用来破坏蛋白质-蛋白质之间的相互作用和将细胞连接在一起的细胞外基质。它们的作用取决于包括pH值、温度和辅助因素在内的因素，因此在选择酶时必须小心。一些治疗方法如果长时间不中和可能会损伤细胞，细胞表面的抗原可能会丢失。
- 像EDTA和EGTA这样的螯合剂可以去除负责维持细胞功能和完整性的二价阳离子，但它们的存在可能会抑制某些酶。
流分选介质
- 待分选的细胞悬浮在无钙无镁PBS中。血清添加量可达1%。
- 分选介质也是无钙无镁PBS。对于需要对分选细胞进行培养或功能分析的实验，PBS必须是无菌的。
- 细胞被分装到含有0.5ml或更多纯血清的试管中。
样本过滤
在流式细胞仪中读取所有样品之前，必须对它们进行过滤
在加工过程中，在大多数仪器上，电池将通过70 μm或以上的喷嘴。块状和碎屑会堵塞仪器的流体，使测量结果失真或完全阻塞。
所有染色程序完成后，必须通过40-50 μm的尼龙网过滤细胞。这应该在排序之前进行。
使用可重复使用的注射器、延长管和50 μm尼龙网过滤
准备:使用注射器，延长管和尼龙网。从注射器上取下针头，找到注射器边缘的尼龙浆料，将延长管的右侧连接到注射器上，中间有网孔。将延长管剪离连接器约1cm。
过滤:取出活塞杆，将样品从试管中倒入注射器，然后将活塞杆带回注射器，轻轻将活塞推入一个新的空的干净试管中。在每个样品之间用PBS清洗注射器过滤器。
注射器:Bactlab (Becton Dickinson)，各种尺寸。
伸缩管:梯瓦医疗，凯特。没有:MG918420。
尼龙胶:A.D.西农，凯特。编号:r0050h380315, 50微米。
用现成的过滤器过滤
用移液管强迫细胞通过过滤器进入试管。
过滤器
- Partec GmbH，生产无菌猫。04-004-2327，单包装50um过滤器，用于非无菌。没有04-0042-2327。两者都适用于5ml FACS管
- Bactlab,猫。不。FAL352340，无菌40um过滤器-适用于50毫升管。