蛋白质分析样品制备

Biacore样品制备

用户应携带适合计划工作的传感器芯片。配体(一种通过其NH2-基团以共价固定在芯片表面的化合物)必须溶解在不含任何主氨基的缓冲液中(例如铵离子、Tris、甘氨酸、乙醇胺、三乙胺、谷胱甘肽等)。所需的固定材料的最终浓度应至少为10微克/毫升。如果常见的Biacore缓冲液(Hepes, NaCl, EDTA, Tween20)不兼容,用户应准备适合其系统的缓冲液。缓冲液必须是新鲜的,并通过0.2微米的过滤器。

ITC样品制备

根据预期的解离常数优化细胞内蛋白质的起始浓度是至关重要的。此外,滴定剂(“配体”)的浓度应该比细胞中的蛋白质浓度高大约10倍。最后,细胞至少需要0.4ml蛋白溶液,注射器约80μl。
实验设置非常简单:一个含有“配体”(小分子配体或相互作用的蛋白质)的注射器被滴定到含有蛋白质溶液的细胞中。关键的是,两个解的缓冲区必须相同。这可以通过对同一缓冲液进行两种物质的透析来实现。

DSC样品制备

1ml中蛋白的浓度应为0.5-1mg/ml。关键是,参考单元格和样本单元格中的缓冲区必须相同。

MST样品制备

蛋白质(一种会被标记的化合物)应该在不含伯胺的缓冲液中(例如铵离子、三胺、甘氨酸、乙醇胺、三乙胺、谷胱甘肽或咪唑)。这些物质将显著减少蛋白质标记。此外,他的标签可以被标记。用于标记的蛋白质浓度应不小于5µM。
未标记化合物应在预期解离常数的X 10-20范围内。

FFF样品制备

颗粒应在经过过滤的水溶液中。还应准备两升新过滤的跑步缓冲液。

NanoSight样品制备

颗粒应在经过过滤的水溶液中。还应准备两升新过滤的跑步缓冲液。