蛋白质分析关于

蛋白质分析单元提供以下服务:

  • 生物分子相互作用分析:(Biacore)，等温滴定量热(ITC)和微尺度热泳(MST)。
  • 蛋白质表征:差示扫描量热法(DSC)以及差示扫描荧光法(DSF)。
  • 各种粒子的检测、定量和分离:纳米视觉和场流分馏(FFF)。

这些服务提供给魏茨曼研究所的科学家，以及公司和其他学术机构。

生物分子相互作用分析

Biacore

这种生物传感器技术基于表面等离子体共振(SPR)原理。SPR是一种非侵入性光学测量技术，它可以在特定制备的表面附近检测生物分子的质量浓度。SPR是一种强大的技术，用于测量所有类型的分子相互作用之间的结合。这包括药物和靶标、抗体和抗原或任何相互作用的分子对，包括蛋白质-蛋白质、蛋白质-核酸和蛋白质-脂类相互作用。相互作用是实时测量的，允许不同分子之间的相对比较或动力学参数的确定。SPR不要求对测试分子进行任何类型的标记。所有实时动力学数据都是在BIAcore T200或S200仪器上完成的。定量信息，例如复杂地层的动力学参数和平衡常数，可以在10的范围内获得4到10-12年M。Biacore系统根据它们的特性来描述分子:

  • 相互作用的特异性
  • 开关速率常数(动力学)
  • 结合强度(亲和度)

等温滴定量热法

ITC PEAQ是一种分析工具，可以测量任何两个生物分子之间的结合亲和力和热力学。绑定常数在10的范围内3到109M是可以测量的。
ITC被认为是结合检测的“金标准”，具有许多优点:

  • 直接测量与结合有关的热交换
  • 无标签-使用天然材料
  • 真正的溶液内技术
  • 只需极少的化验开发
  • 没有分子量限制
  • 为了
  • 用途广泛，可用于任何生物分子——蛋白质、核酸、小分子药物、脂类等。
  • 可用于广泛的生物缓冲液，离子强度，pH值

在一个ITC实验中，我们可以确定:

  • 结合亲和力- KD(直接测量亚毫摩尔到纳摩尔)
  • 利用竞争性ITC方法将亲和范围扩展到皮摩尔
  • 结合位点数量
  • 多个不同的结合位点
  • 结合焓(ΔH)和熵(ΔS)

微热泳入(MST)

我们的单元包含三种MST仪器:picoMST，无标签MST, microMST。

微尺度热电泳(MST)是一种用于生物分子相互作用分析的技术。MST是一种在微升尺度上快速、精确地量化溶液中生物分子相互作用的方法。微尺度热泳是粒子在微观温度梯度中的定向运动。由于结构/构象的变化，生物分子水化壳的任何变化都会导致沿温度梯度运动的相对变化，并用于确定结合亲和力。MST允许在接近天然条件下直接在溶液中测量生物分子的相互作用(小分子，DNA, RNA，蛋白质，多肽，糖，脂质，核糖体等)。测量可以在选择的溶液中进行，从标准缓冲液到复杂的生物液体，包括血清或细胞裂解物。其中一种反应物应进行荧光标记(不是在无标记MST中)。MST仪器Monolith NT.115提供可靠的测量，适用于KD取值范围为103到10-12年m。

生物分子的生物物理特征

差示扫描量热法(DSC)

DSC连续测量系统的热容作为温度的函数，允许同时确定热转变的焓、熵和吉布斯能。这一信息已被证明在蛋白质折叠和寡核苷酸构象的表征中极其重要。
差示扫描量热法(DSC)是一种功能强大的分析工具，可以直接测量与蛋白质、脂质或核酸展开相关的热变化。在DSC中，当生物分子以恒定速率加热时，可以准确测量与热变性相关的可检测的热变化。DSC实验有:

  • 无标签，使用天然材料
  • 真正的溶液内技术
  • 易于操作-需要最少的化验开发
  • 使用广泛的生物缓冲液，离子强度和pH值进行
  • 通用分析-测量与变性相关的热变化
  • 非光学的-不受有色或混浊样品的影响
  • 多功能-可用于蛋白质，核酸，脂类和其他生物分子

在一个DSC实验中，我们可以确定:

  • 过渡中点(Tm)
  • 与展开相关的焓(ΔH)和热容变化(∆Cp)

差示扫描荧光计

NanoDSF Prometheus NT.48是一种先进的差分扫描荧光仪，用于测量超高分辨率蛋白质稳定性，使用本征色氨酸或酪氨酸荧光。应用领域包括抗体工程、膜蛋白研究、配方和质量控制。

该方法简便、快速，可分析蛋白质的稳定性。

Prometheus NT.48连续加热48个样品，加热速率可调0.1 - 7°C/min，在15 - 95°C范围内，同时读取荧光和反向反射信号。因此，在与熔化温度并行的情况下，可以确定多达48种不同的聚集起始温度。

由于不需要二级报告荧光团，蛋白质溶液可以独立于缓冲成分进行分析，最大蛋白质浓度范围从250 mg/ml以上到100µg/ml。这使得洗涤剂溶解膜蛋白以及高浓度抗体配方的分析成为可能。

NanoSight

NS300纳米仪器用于颗粒可视化和快速，自动分析直径从~70nm到1000nm的所有类型纳米颗粒的尺寸分布和浓度。该仪器用于纳米粒子、病毒、外泌体和脂质体的分析。

场流分馏(FFF)

AF2000场流分馏(FFF)仪器可以分离和分离粒径范围从10纳米到1微米的颗粒。这种技术根据流体中颗粒的大小，轻轻分离它们。分离的组分可以在任何温度下收集。